原代鸡胚胎成纤维细胞的制备
1. 取9~10日龄的鸡胚，用碘酒和酒精消毒，在超净镜台内，小心取出鸡胚，放在无菌培养皿中，除去头部及内脏；
2. 胚体用含双抗PBS冲洗2~3次，切成1~2mm3的小块，然后转入离心管内；
3. 按每个鸡胚加入3mL的EDTA-胰酶消化液，在室温下消化6~8 min；
4.离心或静置后，收集细胞悬液，没有消化完全的组织块可再消化一次；
5. 收集到的细胞悬液过滤，含血清培养基终止消化，1200转离心5 min，收集细胞；
6. 细胞沉淀用DMEM培养液重新悬浮，以5ⅹ105个/mL（有效浓度，实际浓度可能是７-10ⅹ105个/mL，一个鸡胚配成20-30 mL悬液）接种到培养瓶中，于38.5℃、5%CO2浓度、饱和湿度条件下培养。
7. 大约6小时或过夜后，此时CEF已经贴壁伸展，换液去除杂质细胞。

鸡胚胎成纤维细胞的传代
1. 原代培养的细胞80-90％铺满培养瓶底部时，即可进行传代；
2. 吸出原培养液，然后用PBS清洗细胞2~3次，尽量除去残余的血清；
3. 加入0.2 mL的消化液进行消化，消化程度可在倒置显微镜下观察，一般以细胞突起缩回、细胞间间隙增大、细胞近乎缩成圆形为度；
4. 吸出消化液，加入适量的添加了小牛血清的培养液，反复轻轻吹打培养瓶底部，使经消化的细胞脱离瓶底并分散为单个细胞；
5. 收集细胞悬液，1200转离心5 min，去上清；
6. 用培养液重新悬浮细胞并计算细胞密度，以5ⅹ105个/mL（1：2- 1：3）接种到培养瓶中，于38.5℃、5%CO2浓度、饱和湿度条件下培养。

很好的总结。thanks