‹‹ 上一主题 | 下一主题 ››
发新话题
打印

[其它] 求助

spring86

沙漠之狐

BioMSN Newbie

Rank: 1

帖子
6 
精华
0 
积分
0 
声望
0 点 
金币
31 枚 
注册时间
2008-7-18 
1滴水 大 中 小 发表于 2008-7-26 09:32  只看该作者
大家好：
    我想利用连有1.4Kb左右大小外源基因的pET-21、pET-30转化BL21来表达蛋白，但由于较难转化，我将pET质粒先转入DH5a细胞中，挑取阳性克隆后菌液PCR检测有目的条带，用OMEGA小量质粒提取试剂盒提取质粒后，质粒的量非常少，几乎检测不到，但质粒PCR检测却有目的条带，我想问一下为什么我提取的质粒量这么少？请高人指点！  
      谢谢了！

TOP

zhaowenji

版主

Rank: 23Rank: 23Rank: 23Rank: 23Rank: 23

帖子
327 
精华
0 
积分
20 
声望
4 点 
金币
1631 枚 
注册时间
2007-7-5 
2滴水 大 中 小 发表于 2008-7-26 19:04  只看该作者
首先要确定自己提取质粒的操作要准确无误啊，我想质粒的提取如果第一次提取的量比较少，很简单，重新提取一次
天道酬勤

TOP

廷玥瓴

禁止发言

帖子
41 
精华
0 
积分
0 
声望
0 点 
金币
40 枚 
注册时间
2008-8-11 
3滴水 大 中 小 发表于 2008-8-11 20:46  只看该作者
提示: 作者被禁止或删除 内容自动屏蔽

TOP

小鱼儿

实习斑竹

Rank: 22Rank: 22Rank: 22Rank: 22

帖子
49 
精华
0 
积分
1 
声望
1 点 
金币
15 枚 
注册时间
2007-9-7 

BioMsn Team章

4滴水 大 中 小 发表于 2008-8-12 08:59  只看该作者
你在摇菌的时侯把时间加长点，最好是十六七个小时，这样提的质粒浓度会大一点的。还有在变性的那部一定要控制好时间，不然质粒在复性时就很难了！

TOP

‹‹ 上一主题 | 下一主题 ››
发新话题