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原代细胞冻存

那位有过冻存原代细胞的经验,能否分享一下,我冻存的原代细胞复苏后都死了。
原代细胞应该比较好冻存呀,我的实验室方案:
冻存液配制:FBS  20%, DMSO  10%, DMEM  10%
细胞密度: 1×107/ml
步骤: 冻存液配制后在4度预冷1h,加入细胞后4度预冷1h,转至-80度过夜,再转至液氮罐长期保存。
我们冻存的细胞类型有CEF,273T和精原干细胞
谢谢!
非常实用
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